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构建质粒载体时注意事项,构建质粒的过程

构建质粒载体时注意事项,构建质粒的过程

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  1. 怎样来构建一种新的质粒载体!

1、怎样来构建一种新的质粒载体!

克隆质粒载体的构建:首先将目的基因的编码序列与质粒载体的复制子序列连接,构建出重组质粒。然后通过转化将重组质粒导入大肠杆菌中,筛选出含有重组质粒的菌落。表达质粒载体的构建:将目的基因的编码序列与表达调控序列(如启动子和转录终止信号序列)连接,构建出表达质粒。

质粒形成技术是一种以DNA结合胞嘧啶为主的构建技术,大体来说,它主要是把所需要的基因引物酶及基因改造材料结合在一起形成质粒。载体技术则是把质粒转移到另一种有定位作用的目标载体上,这样就可以准确选择和组装基因。

提取质粒,做酶切。酶切的体系要看你所用的酶。(13)酶切后还是需要进行回收。(14)将回收的片段与你已经酶切好的表达载体的片段连接。(15)再转化至大肠杆菌扩增。(16)PCR检菌,酶切检菌。(17)检菌正确,则你的表达载体构建完成。

重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧!目的基因是以生物基因组DNA为模板,设计引物,PCR出来的。目的产物的序列正确后,就可以构建重组载体。主要方法就是酶切目的产物,连接目标载体,转化大肠杆菌感受态,最后鉴定一下单克隆是不是阳性克隆就OK了。

目的基因质粒的载体构建 基因疫苗大多采用质粒作载体。

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