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1. 植物表达载体构建的全过程?

1、植物表达载体构建的全过程?

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

构建基因表达载体的步骤不论动植物都是一样的。首先需要用工具酶剪切运载体上的DNA分子，然后用DNA连接酶将目的基因与被被切割的DNA分子连接。在这里的运载体有一定的要求，倘若不清楚可以追问。但是基因表达载体导入植物，动物，细菌的方法就不一样了。导入植物的方法有，鸟枪法，农杆菌转化法，基因枪法。

目的基因克隆载体：其功能是保存和克隆目的基因。与 微生物基因工程相似，通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载 体。 （2）中间克隆载体：是构建中间表达载体的基础质粒。是由 大肠杆菌质粒插入T-DNA片段、目的基因和标记基因等构建 而成。 （3）中间表达载体：是含有植物特异启动子的中间载体。

构建植物siRNA表达载体：设计编码产生小分子发卡RNA（hairpin：RNA，hpRNA）的DNA序列，编码hpRNA的DNA各链反向互补，中间加上7个碱基的间隙，将其连接到农杆菌双元载体质粒上，构建植物表达载体。

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