大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建抑制表达载体的问题，于是小编就整理了1个相关介绍构建抑制表达载体的解答，让我们一起看看吧。

1. 如何构建RNA干扰载体?

1、如何构建RNA干扰载体?

要利用RNAi技术研究基因的功能，首先要构建RNA载体。首先，根据已知的DNA序列，对其进行反式转录，得到目标基因的mRNA序列，然后将mRNA序列进行剪切，得到短的RNA片段（siRNA），最后将这些siRNA片段结合到RNA载体上，就可以构建RNA载体。

引入BamHⅠ-SmaⅠ位点，得到小片段S，正向插入上述反义表达载体，得到RNAi表达载体p35S∷L（A）-S-GUS-tNOS，预计转录后将形成一个RNA茎环结构并诱导目的基因产生RNAi---举个例子。酶切位点应该添加到上下游引物的5‘端，不知道你加错没有。

用RNase Ⅲ 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。

要进行shRNA载体构建，首先需要根据自己的基因，设计出对应的 靶点 、 loop序列 ， 酶切位点序列 ，详见 LncRNA的shRNA慢病毒载体引物设计 - 引物先用10000g在4°离心2min，再按照说明书的要求，加入DEPC或者无酶ddH2O将寡核苷酸稀释为100 μM。

到此，以上就是小编对于构建抑制表达载体的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建抑制表达载体的1点解答对大家有用。