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1. shRNA实验步骤

1、shRNA实验步骤

rna的选择：需要根据研究对象的需要，选择适合的RNA探针（如siRNA、shRNA、miRNA、lncRNA等）。rna标记：为了方便后续检测和定位RNA分子，可以使用荧光标记、生物素标记或其他标记化方法对RNA分子进行标记化处理。

基因沉默一般用siRNA或者质粒 ，siRNA是双链RNA，其中一条链与靶基因的mRNA序列互补。将此双链RNA转染至细胞 能够沉默靶基因的表达 shRNA质粒 转染进细胞能够表达shRNA（发卡结构） 和双链RNA差不多 只不过是发卡结构。发卡的一条臂与靶基因mRNA互补。

通过shRNA和DN-ECAD技术的实验，证实了E-cadherin缺失通过双重作用：破坏细胞连接和激活内在信号通路，从而驱动这些生物学过程。例如，shEcad会导致EMT、运动性和转移性显著增加，而DN-ECAD的影响相比之下则较轻微。

构建稳定细胞系的原理，如同在细胞内部嵌入一个定制的基因开关。科学家将外源的DNA或shRNA巧妙地嵌入带有抗性基因的载体，这个载体就像一个导航者，引领着这些基因片段进入宿主细胞的基因组。随后，载体中的抗性基因就像是一个标记，帮助我们筛选出那些成功整合了外来基因的细胞。

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