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1. 我有一段目的基因,需要构建表达载体,此时是扩增目的基因的全长还是?

1、我有一段目的基因,需要构建表达载体,此时是扩增目的基因的全长还是?

目的基因重组表达载体的构建是将目的基因与适当的调控序列（如启动子、转录终止信号序列等）和标记基因连接在一起，形成重组表达载体。这个过程通常需要使用限制性核酸内切酶和连接酶等工具酶，以确保重组载体的正确性和稳定性。

当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。

有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切，然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上，再从过度载体抢切下目的基因，最后再连接到酶切过的表达载体上。

切割质粒和目的基因的限制酶必须是同-.种酶，以获得相同的黏性末端，利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。通过载体把目的基因片段导入活细胞。

又由于在不同植物中目的基因mRNA丰度不同，所以获得目的基因的难易程度又不一样，特别是对于丰度比较低的目的基因即使使用不用的方法也不一定能获得成功。

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