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载体构建相关实验技能掌握-载体构建有几种方法

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  1. 真菌表达载体怎么构建?求 真菌表达载体构建的师兄师姐指点?万分感谢...

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理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。

基因表达载体的构建:将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。将目的基因导入受体细胞:将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。

目前已经利用cbh1强启动子构建了木霉高效表达载体(吕丹丹,2012;汪天虹等,2003),研究证明,利用cbh1强启动子和终止子构建表达载体,均能提高内源和外源基因的表达(Margolles-Clark et al.,1996 f;母敬郁等,2006;龙昊,2006;金欣等,2011;王冰冰等,2011;董欣睿等,2012)。

从自然界中筛选出产褪黑素合成基因的来源。这些基因可以来自于植物、真菌、动物等多种生物。将筛选出的基因进行克隆和序列分析,确定其序列和功能。将产褪黑素基因与枯草芽孢杆菌的表达载体结合,构建成产褪黑素表达系统。将构建好的表达系统转化到枯草芽孢杆菌中,使其能够表达产褪黑素。

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