大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于双荧光载体构建的问题，于是小编就整理了1个相关介绍双荧光载体构建的解答，让我们一起看看吧。

1. 双荧光素酶质粒共转染怎么做?

1、双荧光素酶质粒共转染怎么做?

细胞培养和处理：选择合适的细胞系并进行培养。在进行共转染之前，需要对细胞进行预处理，例如根据实验需要进行细胞处理、刺激或诱导等。共转染：将构建好的双荧光素酶质粒与其他目标质粒（例如表达转录因子、信号分子等）一起转染入目标细胞。

用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。

然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。

检测快速，每个样品只需几秒钟 实验原理 利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。

为了减少实验误差，同时转染一个能稳定表达的 肾荧光素酶 的质粒作为内参，催化 腔肠素 氧化产生蓝光（波长460-540nm）；所以叫双荧光素酶报告基因检测。

到此，以上就是小编对于双荧光载体构建的问题就介绍到这了，希望介绍关于双荧光载体构建的1点解答对大家有用。