大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于载体一直构建不好怎么回事的问题，于是小编就整理了1个相关介绍载体一直构建不好怎么回事的解答，让我们一起看看吧。

1. 构建启动子载体遇到了困难,总出现假阳性的克隆,菌液PCR检测不到目的片 ...

1、构建启动子载体遇到了困难,总出现假阳性的克隆,菌液PCR检测不到目的片 ...

我想这是因为你的启动子检测载体设计的不合理造成的，你可以在启动子前而加一个转录终止子，以阻止这种假阳性信号。还有一个原因是：如果是原核生物，启动子本来就只有几十甚至十几个bp，PCR检测不到很正常。

最后说测序是空载，这可能是酶切不完全造成的，载体并没有完全切开，如果是单酶切还有可能是载体自连造成的。另外，菌落PCR很容易出现假阳性，你可以结合酶切鉴定或是菌液PCR，从而减少假阳性出现的概率。刚开始做克隆多多少少会出现一些问题，俗话说熟能生巧，好多问题往往重复一遍就能得到解决。

很显然你的质粒没有构建成功。感觉是连接出了问题，pBI121载体很大，回收比较困难，建议你测一下回收后的浓度。如果太低的话，建议加大酶切量。121载体至少应该达到50-100ng，然后再按1：3-10摩尔比加入小片段.至于PCR验证出现假阳性，太正常了。还是酶切比较靠谱。

简称PCR。聚合酶链式反应（PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。

到此，以上就是小编对于载体一直构建不好怎么回事的问题就介绍到这了，希望介绍关于载体一直构建不好怎么回事的1点解答对大家有用。