本篇文章给大家谈谈载体构建连接反应体系，以及载体连接的原理对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享载体构建连接反应体系的知识，其中也会对载体连接的原理进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 构建载体连接时间最短多长

1、构建载体连接时间最短多长

分钟载体构建（vectorconstruction），为把DNA分子运送到受体细胞中去，必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。载体构建即是构建含外源DNA的质粒。

小时。平末端（bluntend）的连接5’端与3’端并列靠近的时间太短，不容易被连接酶连接。T4DNA连接酶虽然能连接平末端，但效率很低只有粘性末端的效率很低，通常连载时间为小时。

在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

短片段连完直接转化掉是最保险的。长片段有些需要过夜连接。一般24-36小时足够了。现在有些公司有T载体快速连接酶，说明书上说20-30分钟就可以了。有基因克隆方面的需要可以咨询百替生物哦，我们专业提供生物医药技术服务。

可能酶切体系和ECOR1的缓冲体系不一样，试着分别酶切，就是先切cla1，然后纯化后切ECOR1；或者查找哪个酶的酶切效率高些，那个后切；3个小时可能太短了，我一般都是5个小时，或者过夜；可能是你菌挑错了，或污染了，重新调菌或者把原来构建成功的质粒进行转化，再酶切。希望对你有帮助。

到此，以上就是小编对于载体构建连接反应体系的问题就介绍到这了，希望介绍关于载体构建连接反应体系的1点解答对大家有用。