如何构建相同方向的含loxP载体-请详细讲解一下Cre/LoxP重组系统的机理和应用范围!
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于如何构建相同方向的含loxP载体的问题,于是小编就整理了1个相关介绍如何构建相同方向的含loxP载体的解答,让我们一起看看吧。
1、请详细讲解一下Cre/LoxP重组系统的机理和应用范围!
在细菌基因编辑中,Cre-lox 重组系统常用作删除选择标记基因、大片段基因的删除和倒置等。Cre 重组酶发挥作用不需要任何辅助因子,Cre-lox 重组系统具有广谱性,理论上可以在任何细胞环境的任何类型DNA 分子上发挥有效作用。
Cre酶能介导两条DNA链的交换或染色体易位。另外,Cre不仅可以识别LoxP的2个13bp的反向重复序列和8bp的间隔区域,而且当一个13bp的反向重复序列或者8bp的间隔区发生改变时仍能识别并发生重组。
Cre-LoxP重组酶系统是一种动态且可逆的DNA操作工具,它在DNA序列的处理中展现了多种功能。具体来说,Cre酶在不同条件下执行以下三种操作:首先,当两个LoxP位点在同一DNA链上,且方向一致时,Cre酶会精确地切除这两个位点之间的序列,实现高效切割。
Cre-loxp 是一个基于传座效应的DNA片段同源重组系统。Cre是一个酶,可以识别一段DNA序列中相邻的两个loxp片段,并将两个loxp间的DNA序列剪切,在原位点上只留下一个loxp,也可在两段都带有两个相邻loxp序列的DNA序列间介导同源重组,达到交换DNA片段的目的。
Cre-LoxP系统既可以在细胞水平上用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞,通过识别LoxP位点将抗性标记基因切除,又可以在个体水平上将重组杂合子小鼠与Cre转基因小鼠杂交,筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。
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