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1. 为实现目的基因与载体结合,以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质,研究...

1、为实现目的基因与载体结合,以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质,研究...

[操作步骤 操作步骤] 操作步骤 通过 PCR 方法获得目的基因：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因 序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点，本实验中为 BamHⅠ和 HiindⅢ） ，PCR 循环获得所需基因片段。

选择载体，利用限制性内切酶和DNA连接酶将目的基因插入载体（如果在表达前你还需要筛选或检测，可能你还要再插入标记基因）将载体导入受体细胞。植物可以选择导入体细胞，然后根据全能性进行植物组织培养。动物就要用显微注射导入受精卵才能表达。

大肠杆菌是原核生物，目的蛋白质基因如果是原核生物的基因：经测序正确后，利用PCR扩增该基因，酶切连接到质粒，转化大肠杆菌筛选阳性克隆，鉴定正确后诱导表达。

这样的质粒导入受体细胞后，大肠杆菌不抗链霉素但抗青霉素；如果质粒中没有插入目的基因，则抗链霉素的基因没有被破坏，则导入大肠杆菌后，抗链霉素的同时也产生抗青霉素；由于大肠杆菌内没有任何抗性基因，所以如果既不抗链霉素也不抗青霉素，说明根本没有导入质粒。

通常叫目的基因导入受体细胞。一般来讲在基因工程的操作，有的是为了创造出整合新基因，有的是为了克隆蛋白获得高表达的产物以达到纯化鉴定的目的。细菌如大肠杆菌是原核生物的一种，其集中的DNA区叫拟核，还有质粒DNA。

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