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1. 请教如何构建双报告基因表达载体

1、请教如何构建双报告基因表达载体

作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：（1）已被克隆和全序列已测定；（2）表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；（3）其表达产物能进行定量测定。

构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。这个基因构建过程通常通过分子克隆技术来完成。转染细胞：将上述构建好的表达载体引入目标细胞中。

构建基因表达载体 DNA的分子链被切开后，还得缝接起来以 5年，科学家们在1967完成基因的拼接。 个实验室里几乎同时发现并提取出一 种酶，这种酶可以将两个DNA片段连接起 年以1974来，修复好DNA链的断裂口。 后，科学界正式肯定了这一发现，并把这 种酶叫作DNA连接酶。

当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。

首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键。

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