基因表达载体的构建在体外(基因表达载体的构建是基因工程)
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1、基因工程哪个步骤在体外(细胞外)进行
基因工程有四个过程,提取、导入、检测、表达。重组质粒是第二步导入里很重要的一个步骤 举个例子,比如说要制备抗虫棉,但是棉花本身是没有这样的基因的,有的细菌里有,所以从一种叫做苏云金芽孢杆菌的细菌体内提取出这样的基因,然后把基因与质粒重组在一起,形成重组质粒后就可以导入到棉花细胞里了。
是在体外进行的。质粒的提取有很多的方法,有化学试剂法和试剂盒法,主要原理都是利用环状的质粒DNA的稳定性比线状DNA好,从而将线状DNA破碎并结合一些物质与细胞碎片沉淀,再把蛋白质沉淀,这样就可以得到DNA环状质粒。内切酶是在细胞中发现的,可以通过基因的改造让这种菌能积累这种酶然后提取。
质粒不都可以作为运载体,作为载体要有几个标准,主要的要有酶切位点,有标记基因(方便检测),可以稳定的再受体细胞存在并复制。2 重组的质粒的形成在细胞外,然后在导入受体细胞。
将目的基因导入受体细胞:将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因的片段与运载体在生物体外连接形成重组DNA分子后,下一步是将重组DNA分子引入受体细胞中进行扩增。 (4)目的基因的检测和表达:目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传特性,只有通过检测与鉴定才能知道。
【答案】:重组DNA的主要步骤主要包括以下4个基本步骤:(1)目的基因的获得;(2)目的基因与载体分子在体外进行连接反应,形成重组体;(3)将人工重组的DNA分子导入能进行正常复制的寄主细胞,从而得到复制:(4)重组体分子的转化子克隆的选择和筛选。[考点]重组DNA的过程。
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