本篇文章给大家谈谈载体构建为啥先连T载体，以及载体构建失败原因对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享载体构建为啥先连T载体的知识，其中也会对载体构建失败原因进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 构建重组质粒之前为什么先连接t载体

1、构建重组质粒之前为什么先连接t载体

先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化，容易连接片段（也就是效率较高），因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确（商业化的缘故），因此测序也方便一些。

其实是可以直接连到目的载体的，而且大多数情况下就是这么做的，但是前提是你PCR的产物已经加好相应的酶切位点以及保护碱基，然后测序检测结果就可以了。

首先，构建重组质粒是通过DNA连接酶，如T4噬菌体DNA连接酶或大肠杆菌DNA连接酶，将经过酶切的载体与外源DNA片段连接起来。T4噬菌体DNA连接酶可连接粘性末端和平末端，但平末端连接效率较低，通过调整酶浓度和DNA浓度可以提高效率。连接过程包括酶-ATP复合物结合DNA、DNA腺苷化和磷酸二酯键形成。

pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。

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