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1. 构建酵母双杂载体,其中一个基因老是连接不上是什么原因

1、构建酵母双杂载体,其中一个基因老是连接不上是什么原因

造成假阴性的原因主要有两 方面：一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的载体。二是蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感的菌株及多拷贝载体。目前假阴性现象虽不是实验中的主要问题，但也应予以重视。

酵母双杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构 （modular） 特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域， 其中DNA结合结构域（ binding domain， BD）和转录激活结构域（ activation domain， AD）是转录激活因子发挥功能所必须的。

用重组DNA技术将某种生物细胞的总 DNA 或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。

激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中，蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达（如lacZ），从而可分析蛋白间的结合作用。应用 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用，具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。

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