大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体时双酶切的目的的问题，于是小编就整理了1个相关介绍构建载体时双酶切的目的的解答，让我们一起看看吧。

1. 本实验为什么选择双酶切?双酶切该注意什么?

1、本实验为什么选择双酶切?双酶切该注意什么?

本实验选择双酶切能保证酶的有效切割，双酶切该注意酶切顺序。在双酶切载体时2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序。有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的，则必须先切，否则就可能造成酶切失败。

用两种酶是为了得到链状的目的基因，一般是不用一种酶的，比如一种限制性内切酶可以得到 ---TA 的末端，因为DNA是双链，那么目的DNA的两端就可以形成互补（这里由于版面的关系我就不表示出来了，你自己简单的画个示意图就明白），产生一个环状的DNA分子，就很难用于研究了。

双酶切，试验中要注意 做转化的时候，进行酶连接反应时，需要注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时16度。对含有AMP RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来。

双酶切就是为了验证是否有目的基因，如果双酶切条带正确，而且PCR也没有问题，就可以确定质粒构建成功。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段（10kb）且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。

有两个方面，一是载体本身酶切不充分，没有完全切开；二是去磷酸化不充分。

到此，以上就是小编对于构建载体时双酶切的目的的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体时双酶切的目的的1点解答对大家有用。