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1. 简述重组载体构建的原理和步骤

1、简述重组载体构建的原理和步骤

原理步骤如下：载体构建的原理：载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中，以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒，其具有自主复制和传递的能力。质粒由多个功能区域组成，包括起始子、选择性标记基因、多克隆位点等，区域可以用于插入和操作外源DNA。

重组载体构建是指利用分子生物学技术将外来DNA序列与一个载体DNA连接，形成一个新的DNA分子，以便于将其用于基因编辑、基因转移等研究中的工具。重组载体一般是将目标基因的DNA序列从某个原细胞的基因组中分离并扩增，在该序列的两端加上适当的连接序列，然后将其插入到适合的载体中。

纯干货：同源重组构建载体——PCR扩增基础入门 PCR，即聚合酶链式反应，是一种生物技术的瑰宝，它犹如DNA世界的放大镜，能在体外复制特定的DNA片段，实现基因的高效扩增。其核心原理是利用DNA聚合酶在特定温度控制下，从单链DNA模板合成互补链，从而实现序列的大量复制。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

其中 T5 核酸外切酶具有 5’3’核酸外切酶的活性，能够将序列从 5’3’开始降解，此时暴露出载体以及片段的3’同源序列，经过碱基互补配对，DNA 聚合酶添加缺失碱基后由 DNA 连接酶将片段与载体进行连接，从而达到载体重组的功能。因此，如果不添加同源序列，载体与片段、片段与片段之间将无法进行连接。

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