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rnai的载体为何构建不出来-为什么rna结构不稳定

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  1. 如何构建RNA干扰载体?

1、如何构建RNA干扰载体?

“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法,被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是:通过PCR方法得到目的基因的片段(添加了合适的酶切位点),使之正反相连形成顺式片段和反式片段。

要利用RNAi技术研究基因的功能,首先要构建RNA载体。首先,根据已知的DNA序列,对其进行反式转录,得到目标基因的mRNA序列,然后将mRNA序列进行剪切,得到短的RNA片段(siRNA),最后将这些siRNA片段结合到RNA载体上,就可以构建RNA载体。

引入BamHⅠ-SmaⅠ位点,得到小片段S,正向插入上述反义表达载体,得到RNAi表达载体p35S∷L(A)-S-GUS-tNOS,预计转录后将形成一个RNA茎环结构并诱导目的基因产生RNAi---举个例子。酶切位点应该添加到上下游引物的5‘端,不知道你加错没有。

用RNase Ⅲ 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。

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