载体的构建要几种酶体,载体结构的三大要素
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1、基因工程中主要的工具酶有哪几种,它们的作用是什么?
基因工程中主要的工具酶有限制酶和dna连接酶。
限制酶的作用是切割目的基因两端,而dna连接酶是将目的基因和运输体的黏性末端连接在一起。
基因工程工具酶主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类,具体解释如下:
1、DNA限制性内切酶生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息;
2、连接酶它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键;
3、聚合酶系专司生物催化合成脱氧核糖核酸和核糖核酸的一类酶的统称;
4、核酸酶核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等,可水解相应的DNA和RNA,核酸酶S1可降解单链DNA和RNA,用量增大也可降解双链核酸,它可用于切去ds-cDNA合成中产生的发夹环;
5、修饰酶体内有些酶可在其他酶的作用下,将酶的结构进行共价修饰,使该酶活性发生改变,这种调节称为共价修饰调节。
限制性核酸内切酶,用来切割目的基因和载体,主要是2型酶;DNA连接酶,用来连接目的基因和载体,有两类,连接平末端的和粘性末端的,若末端不相同连不起来的话,还得用DNA聚合酶来加片段,如加CCC-和GGG-,再用连接平末端的连接酶来连接,高中的话这一点不必掌握;
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