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构建基因表达载体是什么步骤,构建基因表达载体包括什么

构建基因表达载体是什么步骤,构建基因表达载体包括什么

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  1. 怎样构建植物的表达载体,例举所用的目的基因以及构建的载体类型

1、怎样构建植物的表达载体,例举所用的目的基因以及构建的载体类型

首先需要用工具酶剪切运载体上的DNA分子,然后用DNA连接酶将目的基因与被被切割的DNA分子连接。在这里的运载体有一定的要求,倘若不清楚可以追问。但是基因表达载体导入植物,动物,细菌的方法就不一样了。导入植物的方法有,鸟枪法,农杆菌转化法,基因枪法。

载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。

中间克隆载体:是构建中间表达载体的基础质粒。是由 大肠杆菌质粒插入T-DNA片段、目的基因和标记基因等构建 而成。 (3)中间表达载体:是含有植物特异启动子的中间载体。是 构建转化载体的质粒。 (4)卸甲载体:是解除武装的Ti质粒或Ri质粒,是构建转化 载体的受体质粒。

为构建高效植物表达载体,人们需要对天然质粒及病毒进行一系列改造,如加上耐药性基因片段等,以提高基因转化、筛选、表达的效率。

构建植物siRNA表达载体:设计编码产生小分子发卡RNA(hairpin:RNA,hpRNA)的DNA序列,编码hpRNA的DNA各链反向互补,中间加上7个碱基的间隙,将其连接到农杆菌双元载体质粒上,构建植物表达载体。

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