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突变体构建载体-构建突变体的作用

突变体构建载体-构建突变体的作用

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  1. 如何根据一个单位点的突变体,研究一个基因的功能?

1、如何根据一个单位点的突变体,研究一个基因的功能?

寻找该基因过量表达的个体,观察表型和一般个体的差异,也可以作为一个参考。这些知识给你的研究提供思路,最后你要克隆得到该基因,在一个该基因缺失的突变体(株)内表达该基因,如果你在该个体内检测到表达并且该个体和一般个体性状差异消失,那么证明该个体是控制此性状的基因(之一)。

Ⅱ、基因敲入(gene knock-in): 基因打靶的一种方式,即通过基因打靶用一种基因替换另一种基因,以便确定它们是否具有相同功能。插入性载体:将正向选择基因插入内源基因的功能区域造成插入突变。

查查与其同源的基因在其它生物尤其是亲缘关系很近的生物体内有没有已经被证明功能的,或者猜想与什么功能有关的。寻找突变体(该基因缺失的个体)或者设计序列沉默该基因,然后观察其表型和正常个体有什么差别。寻找该基因过量表达的个体,观察表型和一般个体的差异,也可以作为一个参考。

通过blast数据库,寻找同源基因,及其编码蛋白,获得初步基因,及其功能。在基因组所在物种中,通过对特定基因的定点突变(可由相关公司订做)或基因沉默,构建突变体。通过蛋白免疫等方法,确定蛋白表达部位。

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