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1. 农杆菌转化实验步骤

1、农杆菌转化实验步骤

农杆菌转化法的过程如下：转化：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上--进入农杆菌--导入植物细胞--目的基因整合到植物染色体的DNA上--目的基因得以稳定维持和表达。获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。基因表达载体的构建：将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。

农杆菌转化法详细过程如下：获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。将目的基因导入受体细胞：将含有目的基因的重组质粒导入根癌农杆菌（根癌农杆菌为受体细胞）。

农杆菌转化法的实验步骤 整个转基因体系的建立步骤大致可以归纳为：基因表达载体的构建－载体的农杆菌转化－农杆菌与植株共培养－转化植株的筛选－转化植株的鉴定。在每一步中都涉及到很多的方法与技术。1．获取目的基因：用限制性核酸内切酶分别切割下目的基因（如抗虫基因）和Ti质粒。

农杆菌GV3101转化质粒的热激法步骤如下： 将-80℃保存的GV3101农杆菌感受态细胞在冰上或室温融化。 在无菌条件下，向刚刚化冻的感受态细胞悬液中加入1 μg需要转化的质粒DNA，轻轻混匀，冰水浴中静置10分钟。 将离心管置于液氮中速冻5分钟。

⑦ 置液氮中10 s，放入-20℃冰箱中保存备用。

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