大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于载体构建中连接转化连不上的问题，于是小编就整理了1个相关介绍载体构建中连接转化连不上的解答，让我们一起看看吧。

1. 构建酵母双杂载体,其中一个基因老是连接不上是什么原因

1、构建酵母双杂载体,其中一个基因老是连接不上是什么原因

造成假阴性的原因主要有两 方面：一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的载体。二是蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感的菌株及多拷贝载体。目前假阴性现象虽不是实验中的主要问题，但也应予以重视。

用重组DNA技术将某种生物细胞的总 DNA 或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。

酵母双杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构 （modular） 特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域， 其中DNA结合结构域（ binding domain， BD）和转录激活结构域（ activation domain， AD）是转录激活因子发挥功能所必须的。

培养条件问题：可能是由于培养条件不适合导致的，例如温度、养分等条件没有达到要求，导致酵母无法正常生长。 杂菌污染：培养基中被杂菌污染，导致酵母无法正常生长。 等待时间不足：在酵母双杂实验中，蛋白最常见的变化时间为12至24小时，有时可能需要更长时间。

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